生孢梭菌
??【編號】:VIP(H)137005 ??【名稱】:生孢梭菌 ??【規(guī)格】:凍干粉 ??【價格】:750元 生孢梭菌標準ATCC19404使用說明書
1 復(fù)蘇菌種前應(yīng)準備適于該菌種生長的固體、液體培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備,所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護及無菌條件下進行。
2 啟開菌種生孢梭菌標準ATCC19404前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在無菌條件下,按鋁蓋上的箭頭方向打開塑蓋,撕開鋁蓋,打開西林瓶膠塞,加入0.3mL左右的配套液體培養(yǎng)基,用無菌滴管反復(fù)吹吸,將凍干菌種溶解成為懸液,然后用無菌滴管或接種環(huán)移至斜面、平板或液體培養(yǎng)基,并連同剩余菌懸液的西林瓶一起放置于36℃培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。(菌種與培養(yǎng)和保存方法對應(yīng)表見附表1,培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法和傳代保存方法見附表2)。
3 次日觀察菌種的生長情況,如未生長,應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)24h,或吸取培養(yǎng)之后的菌懸液中再次接種培養(yǎng)基,培養(yǎng)24h觀察。
4 菌株為一次性使用品,開啟之后不能反復(fù)使用或保存,暫不開啟的菌種應(yīng)在4℃保藏。
5 復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用,建議菌種使用5代后棄用。
注):購買后請盡量及時使用凍干菌種,如發(fā)現(xiàn)菌種不活或污染等情況,請在購買之日起1個月內(nèi)與我們聯(lián)系。
凍干菌種生孢梭菌標準ATCC19404復(fù)蘇示意圖:
附表1 菌種與培養(yǎng)和保存方法對應(yīng)表凍干菌株復(fù)蘇方法
附表2 培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件和保存方法
方法1:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基,充分懸浮后取適量的菌懸液于營養(yǎng)瓊脂(022020)斜面上35-37℃劃線培養(yǎng)24-48h。斜面(第一代)放于4℃冰箱保存,每個月轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法2:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基,充分懸浮后取適量的菌懸液于營養(yǎng)瓊脂(022020)斜面上劃線35-37℃培養(yǎng)24-48h。斜面(第一代)放于25℃下保存,每個月轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法3:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基,充分懸浮后取適量的菌懸液于血平板(024070)后涂布,35-37℃培養(yǎng)24-48h。平板(第一代)放于4℃冰箱保存,并用封口膜或其它封條密封平板,每半個月轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法4:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基,充分懸浮后取適量的菌懸液于胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSA-YE)(026020)斜面上 35-37℃培養(yǎng)24-48h。斜面(第一代)放于4℃冰箱保存,每個月轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法5:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養(yǎng)基,充分懸浮后取適量的菌懸液于皰肉牛肉粒肉湯(027140)加液體石蠟1cm,35-37℃培養(yǎng)48-72h。肉湯(第一代)放于4℃冰箱環(huán)境下保存,每半個月轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法6:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入堿性蛋白胨水,充分懸浮后取適量的菌懸液于堿性瓊脂(025040)斜面上35-37℃培養(yǎng)24-48h。斜面(第一代)放于25℃下保存,每個月轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法7:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入3%NaCl堿性蛋白胨水,充分懸浮后放置于36℃下復(fù)蘇8-12小時。取適量的菌懸液于3%NaCl營養(yǎng)瓊脂(營養(yǎng)瓊脂(022020)加入2.5gNaCl/100mL)斜面上35-37℃培養(yǎng)24-48h。斜面(第一代)放于25℃下保存,每個月轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法8:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入沙氏液體培養(yǎng)基,充分懸浮后取適量的菌懸液于馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA)(021050)斜面25-28℃培養(yǎng)2-5天。斜面(第一代)放于4℃冰箱保存,每兩個月轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法9:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入布氏肉湯,充分懸浮后取適量的菌懸液于血平板(024070)42±1℃微需氧條件下培養(yǎng)48-72h。平板(第一代)放于4℃冰箱微需氧環(huán)境下保存,并用封口膜或其它封條密封平板,每個星期轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法10:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入TPY肉湯,充分懸浮后取適量的菌懸液于BBL瓊脂(027330)斜面厭氧環(huán)境下35-37℃培養(yǎng)48h-72h。斜面(第一代)放于4℃冰箱厭氧環(huán)境下保存,每個星期轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)銷毀。
方法11:
無菌條件下,用無菌吸管往西林瓶凍干粉中加入脫脂奶粉溶液,充分懸浮后取適量的菌懸液于脫脂奶粉溶液(10%)35-37℃培養(yǎng)48h-72h。 菌種(第一代)放于4℃冰箱保存,每兩個星期轉(zhuǎn)接一次,代數(shù)以此類推,建議使用菌種代數(shù)不超過5代,5代后菌種應(yīng)消毀
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