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紙色譜法根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類(lèi) | |||
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紙層析法又稱(chēng)紙色譜法。以紙為載體的色譜法。固定相一般為紙纖維上吸附的水分,流動(dòng)相為不與水相溶的有機(jī)溶劑;也可使紙吸留其他物質(zhì)作為固定相,如緩沖液,甲酰胺等。將試樣點(diǎn)在紙條的一端,然后在密閉的槽中用適宜溶劑進(jìn)行展開(kāi)。當(dāng)組分移動(dòng)一定距離后,各組分移動(dòng)距離不同,最后形成互相分離的斑點(diǎn)。將紙取出,待溶劑揮發(fā)后,用顯色劑或其他適宜方法確定斑點(diǎn)位置。根據(jù)組分移動(dòng)距離(Rf值)與已知樣比較,進(jìn)行定性。用斑點(diǎn)掃描儀或?qū)⒔M分點(diǎn)取下,以溶劑溶出組分,用適宜方法定量(如光度法、比色法等)。
紙層析是層析法的一種,要了解紙層法還得從層析法開(kāi)始.層析法又稱(chēng)色層分析法或色譜法(Chromatography),是一種基于被分離物質(zhì)的物理、化學(xué)及生物學(xué)特性的不同,使它們?cè)谀撤N基質(zhì)中移動(dòng)速度不同而進(jìn)行分離和分析的方法。例如:我們利用物質(zhì)在溶解度、吸附能力、立體化學(xué)特性及分子的大小、帶電情況及離子交換、親和力的大小及特異的生物學(xué)反應(yīng)等方面的差異,使其在流動(dòng)相與固定相之間的分配系數(shù)(或稱(chēng)分配常數(shù))不同,達(dá)到彼此分離的目的。
層析根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類(lèi),層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。其中紙層析是指以濾紙作為基質(zhì)的層析。
紙層析法原理分配層析在紙層析中的流動(dòng)相是指層析液,在毛細(xì)拉力作用下,層析液能不斷由下向上流動(dòng)。固定相是指被吸附在濾紙纖維之間的水分。由于纖維素上的羥基具親水性使這部分水束縛在纖維素周?chē)?,不易擴(kuò)散而成為固定相。在層析過(guò)程中,當(dāng)層析液在毛細(xì)拉力作用下,上升流經(jīng)色素濾液細(xì)線(xiàn)時(shí),濾液細(xì)線(xiàn)上的色素就相繼融入層析液,隨著層析液上升,并發(fā)生在分配,即有一部分色素從層析液分配溶解到固定相中,直到平衡。由于分配系數(shù)的不同,那些分配系數(shù)大的色素分子,隨層析液向上移動(dòng)得快,形成的色素帶集中在濾紙的上部;而分配系數(shù)小的色素分子,隨層析向上移動(dòng)得慢,形成的色素帶集中在濾紙的下面。
層析法的最大特點(diǎn)是分離效率高,它能分離各種性質(zhì)極相類(lèi)似的物質(zhì)。而且它既可以用于少量物質(zhì)的分析鑒定,又可用于大量物質(zhì)的分離純化制備。因此,作為一種重要的分析分離手段與方法,它廣泛地應(yīng)用于科學(xué)研究與工業(yè)生產(chǎn)上?,F(xiàn)在,它在石油、化工、醫(yī)藥衛(wèi)生、生物科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)等領(lǐng)域都發(fā)揮著十分重要的作用。
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