查詢時請注意選擇相應的產(chǎn)品編號
| PCR的衍生技術(shù)可以模擬生物體的合成 | |||
|---|---|---|---|
|
PCR is the short for Polymerase Chain Reaction,中文是聚合酶鏈式反應,簡單的說就是在體外模擬發(fā)生在細胞內(nèi)的DNA快速擴增特定基因的技術(shù).即屬于DNA amplification中的主要方式.基本反應步驟我就不具體講了 相信不是學生命工程專業(yè)的也不用去學,知道有3步就行,高溫變性,annealing(這個中文我沒有查到,大概意思就是降低反應溫度,并把溫度保持在55攝式度左右一分鐘,叫低溫去火)適溫延伸. 這項技術(shù)主要應用在犯罪學,古生物學和研究人類起源等方面.近年來發(fā)現(xiàn)存在于原核生物基因組中的DNA片段，主要為重復基因外回文序列(repetitive extr-agenic palindromic,REP)和腸菌重復基因問基準序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC)。這些短重復序列在細菌基因組中廣泛分布并具有一定的保守性。利用其保守序列設計長度為15～22個堿基的引物，可擴增細菌基因組中位于重復序列之間的大小不同的DNA片段，通過瓊脂糖電泳可得到重復性較好、具有種特異性或菌株特異性的DNA指紋圖譜。REP-PcR指紋分析技術(shù)即是建立在上述幾種短重復序列引物基礎上的DNA指紋分析技術(shù)。
許多研究者的工作表明，不同引物REP-PCR指紋分析結(jié)果之間在主要類群的劃分上表現(xiàn)出較好的一致性，但對關(guān)系非常密切的菌株的聚類結(jié)果往往隨引物不同而異。為消除這種差別，有些研究者將雙引物或多引物．REP—PCR指紋分析數(shù)據(jù)合并在一起進行聚類分析，以增加菌株指紋圖潛的特異性。
單鏈構(gòu)象多態(tài)性(single stranded conformation polymophism,SSCP)分析，是在PCR產(chǎn)物中加入高濃度的甲酰胺，并在80～90℃變性為單鏈，再行非變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后銀染或放射自顯影，就可得到多態(tài)性的檢測結(jié)果。此法的原理是由于正常序列與變異序列的單鏈構(gòu)象不同，從而電泳的遷移率不同，因此能在電泳上分離區(qū)別。該法靈敏度極高，能鑒別一個堿基的差異。對于一個環(huán)境微生物區(qū)系來說，有許多不同的種群存在其中，如何應用某種特異的基因序列進行種群多態(tài)性的研究，沒有理想的分離技術(shù)是做不到的。SSCP可將序列長度相同而堿基排列不同的片段區(qū)分開，這樣不同種的環(huán)境微生物通過圖譜顯示出來。同時可進行切膠純化直接測序，與GenBank上的已知序列比較，得到種特異的基因序列，達到分類的目的。
總之，由于PCR技術(shù)可以快速特異地擴增任何期望的DNA片段和目的基因，因而在環(huán)境微生物的檢測與鑒定中有重要的實際應用價值。但在實際應用中也存在一些問題，如極少量外源性DNA引起的污染可能導致假陽性出現(xiàn)；試驗條件不當導致產(chǎn)物產(chǎn)生突變；引物設計及靶序列選擇不當可能降低靈敏度和特異性等。盡管還存在著一定的問題，相信隨著該技術(shù)的進一步普及、發(fā)展和完善，可以預料，今后PCR技術(shù)在環(huán)境微生物領(lǐng)域中的應用將進一步擴大，特別是在檢測水體、土壤中的致病細菌、病毒及指示菌等方面發(fā)揮愈來愈大的作用。
PCR的衍生技術(shù)可以模擬生物體的合成，用來測序，可以針對有病的基因，設計引物，制成疾病診斷試劑盒，還有可以針對微衛(wèi)星序列，可以做親子鑒定，加入熒光物質(zhì)，直接做熒光pcr
|
| 上一篇：重鉻酸鉀標準溶液配制與標定的幾種方法 | 下一篇：Biolog方法用于環(huán)境微生物群落研究 |
|---|
無法在這個位置找到： xy/left.htm
2011-2018 北京萊耀生物版權(quán)所有豫ICP備17046142號