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血清學(xué)的檢測三種類別方法簡介 | |||
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血清學(xué)試驗由于其特異性強、靈敏度高、方法簡便,應(yīng)用極為廣泛。目前,凡具有抗原性的物質(zhì),在沒有其他更簡便的方法進行測定時,幾乎都可以用血清學(xué)試驗方法來檢查。近年來在環(huán)境微生物檢測中,除常用的凝集試驗、沉淀試驗、補體結(jié)合試驗、中和試驗等方法外,瓊脂擴散法、免疫電泳法、免疫熒光技術(shù)和酶聯(lián)免疫技術(shù)等方法的應(yīng)用也日趨廣泛。
血清學(xué)試驗檢測抗原或抗體的基本方法,可歸納為兩種類型,即用已知的抗體(如診斷血清)檢測未知抗原、或用已知的抗原(如診斷菌液)檢測未知抗體。
抗原抗體之間,有的在二者發(fā)生特異性結(jié)合之后,在一定條件的影響下,即可出現(xiàn)可見反應(yīng),這種試驗方法稱為直接試驗法,如常用的凝集試驗、沉淀試驗等;有的在二者發(fā)生特異性結(jié)合之后,并不直接表現(xiàn)為可見的反應(yīng),或反應(yīng)不夠靈敏,需借助指示系統(tǒng)或載體使其表現(xiàn)為可見反應(yīng),這種試驗方法稱為間接試驗法。例如補體結(jié)合試驗,利用補體、紅細(xì)胞及溶血素作為指示系統(tǒng),觀察溶血現(xiàn)象的發(fā)生與否;又如間接凝集試驗,將抗原或抗體吸附在載體如膠乳、紅細(xì)胞等顆粒的表面,使抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)通過載體發(fā)生的凝集表現(xiàn)出來。
近年來,迅速發(fā)展的免疫電泳和標(biāo)記技術(shù),使血清學(xué)試驗方法提高到新的水平。免疫電泳法將電泳技術(shù)和沉淀反應(yīng)相結(jié)合,提高了試驗的特異性和靈敏度,應(yīng)用熒光色素、酶及放射性同位素等與抗體(或抗原)結(jié)合來檢測抗原(或抗體)。
經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)分三種類別:凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng)。
一、凝集反應(yīng):顆粒性抗原(細(xì)菌、紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體結(jié)合,在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象,稱為凝集反應(yīng)(Agglutination reaction)。其中的抗原稱為凝集原,抗體稱為凝集素。在該反應(yīng)中,因為單位體積抗體量大,做定量實驗時,應(yīng)稀釋抗體。
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顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng),稱為直接凝集反應(yīng)(Direct www.atcc360.comagglution reaction)。
a.玻片凝集法。是一種常規(guī)的定性試驗方法。原理是用已知抗體來檢測未知抗原。常用于鑒定菌種、血型。如將含有痢疾桿菌抗體的血清與待檢菌液各一滴,在玻片上混勻,數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊,即陽性反應(yīng),證明該菌是痢疾桿菌。此法快速、簡便,但不能進行定量測定。
b.試管凝集法。是一種定量試驗方法。多用已知抗原來檢測血清中有無相應(yīng)抗體及其含量。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進行流行病學(xué)調(diào)查。如肥達(dá)氏反應(yīng)就是診斷傷寒、付傷寒的試管凝集試驗。因為要測定抗體的含量,故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度,然后加入等量抗原,37℃或56℃,2~4小時觀察,血清最高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象的,為該抗血清的凝集效價。
2)間接凝集反應(yīng)
將可溶性抗原(抗體)先吸附在一種與免疫無關(guān)的,顆粒狀微球表面,然后與相應(yīng)抗體(抗原)作用,在有電解質(zhì)存在的條件下,即可發(fā)生凝集,稱為間接凝集反應(yīng)(Indirect agglutination)。由于載體增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積。當(dāng)載體上有少量抗原與抗體結(jié)合。就出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng),敏感性很高。
二、沉淀反應(yīng):可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合,在有適量電解質(zhì)存在下,經(jīng)過一定時間,形成肉眼可見的沉淀物,稱為沉淀反應(yīng)(Precipitation)。反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原,抗體為沉淀素。由于在單位體積內(nèi)抗原量大,為了不使抗原過剩,故應(yīng)稀釋抗原,并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價。
?。保┉h(huán)狀沉淀反應(yīng):是一種定性試驗方法,可用已知抗體檢測未知抗原。將已知抗體注入特制小試管中,然后沿管壁徐徐加入等量抗原,如抗原與抗體對應(yīng),則在兩液界面出現(xiàn)白色的沉淀圓環(huán)。 ?。玻┬鯛畛恋矸磻?yīng):將已知抗原與抗體在試管(如凹玻片)內(nèi)混勻,如抗原抗體對應(yīng),而又二者比例適當(dāng)時,會出現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀,此為陽性反應(yīng)。 |
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