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		熒光分光光度計(jì)的使用方法、功能用途與分類

　　熒光分光光度計(jì)基本原理

　　由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光.

　　不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。

　　在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。

　　熒光分光光度計(jì) 基本結(jié)構(gòu)

　　1. 光源：

　　為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等，故較常用。

　　2.激發(fā)單色器：

　　置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。

　　3.發(fā)射單色器：

　　置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。

　　4. 樣品室：

　　通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排;測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。

　　5. 檢測器：

　　一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉(zhuǎn)為電信號。

　　熒光分光光度計(jì)功能特點(diǎn)

　　1. 熒光發(fā)射光譜

　　選擇某一固定波長的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。

　　2. 熒光激發(fā)光譜

　　選定某一熒光發(fā)射波長記錄熒光發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜。

　　3.時間分辨技術(shù);

　　可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進(jìn)行分辨并分別測量。

　　時間分辨熒光測定公式如下：

　　P(t) = P0 EXP (-t /τ)

　　式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)

　　P0：強(qiáng)度取值

　　EXP：指數(shù)運(yùn)算符

　　t：時間取值

　　τ：熒光平均時間壽命

　　熒光分光光度計(jì)產(chǎn)品應(yīng)用

　　對經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析，可應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化工等部門。

　　熒光分光光度計(jì)分類

　　熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。

　　熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)，自動記錄式熒光分光光度計(jì)，計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì).

　　光分光光度計(jì)三個階段;熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計(jì)，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計(jì)等。

　　經(jīng)過上述的逐步分析闡述，我們了解熒光分光光度計(jì)的工作原理就不難了。最后再提供下小意見，當(dāng)初我們實(shí)驗(yàn)室用的是奧林巴斯的熒光分光光度計(jì)。

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