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		測(cè)量任一細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄因子的其他技術(shù)

　　雖然其他技術(shù)可以測(cè)量任一細(xì)胞因子，轉(zhuǎn)錄因子，或另外的磷酸化蛋白質(zhì)，細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞儀可以測(cè)量多個(gè)細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記同時(shí)上面的singlecell電平。這種方法提供了數(shù)據(jù)信號(hào)反應(yīng)，分化狀態(tài)，和其他細(xì)胞活動(dòng)。特定的細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物的熒光抗體的結(jié)合使用使高分辨率的樣本之間的多種細(xì)胞類型內(nèi)的表型和功能的差異比較分析。

　　在所示的例子中，從人全血中的細(xì)胞進(jìn)行分析的Stat5的磷酸化誘導(dǎo)的IL-2刺激。確定了使用不同人群的天真，效應(yīng)和記憶性T細(xì)胞表型標(biāo)記。除了細(xì)胞表面標(biāo)志物，表型分析中T-bet，簽名參與γ-干擾素的產(chǎn)生，和已知的表達(dá)在NK細(xì)胞，CD8 +效應(yīng)T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子的幫助下，CD4 + T輔助細(xì)胞1（Th1細(xì)胞）細(xì)胞。1,2

　　在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，在IL-2的靈敏度的差異，觀察在不同類型的細(xì)胞。例如，Th1細(xì)胞等和非Th1細(xì)胞效應(yīng)/記憶CD4 + T細(xì)胞亞群（種群F和E，分別）與非常低濃度的IL-2的刺激，中藥標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品網(wǎng)整理提供而幼稚的CD4 + T細(xì)胞（人口D）和幼稚CD8 T細(xì)胞（人口）需要更高劑量的IL-2誘導(dǎo)STAT5磷酸化。

　　人全血刺激后不同濃度的人重組IL-2（0.05?100毫微克/毫升）15分鐘。細(xì)胞固定BD Phosflow?裂解/修復(fù)緩沖區(qū)，通透與BD Phosflow的燙發(fā)緩沖III，染色，熒光抗體具體CD3，CD4，CD45RA，T-賭注，和Stat5（pY694）。使用BD LSR II流式細(xì)胞儀系統(tǒng)用Cytobank軟件樣品進(jìn)行了分析。T細(xì)胞亞群被確定，如圖所示。

　　同時(shí)測(cè)量多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，細(xì)胞因子，和在同一個(gè)樣品的細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)水平的T輔助細(xì)胞（Th）細(xì)胞的分化和功能的研究是非常有用的。RORγt的簽名Th17細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子。重要的是為1,2分泌的IL-17和維持CD4 + CD8 +雙陽(yáng)性胸腺細(xì)胞。

　　所示的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從BALB / c小鼠胸腺和脾臟細(xì)胞中分離。胸腺細(xì)胞或脾細(xì)胞表面熒光抗體染色，具體CD62L，CD44，CD196，或適當(dāng)?shù)拿庖咔虻鞍淄蛯?duì)照。細(xì)胞固定和透BD Pharmingen公司的轉(zhuǎn)錄因子的緩沖液設(shè)置和RORγt的，F(xiàn)oxp3的，IL-17特異的熒光抗體染色，然后在細(xì)胞內(nèi)，和IFN-γ。

　　頂部面板中的細(xì)胞表達(dá)IL-17A較RORγt的表達(dá)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子Foxp3（上）和IFN-γ（Th1細(xì)胞因子）。正如預(yù)期的那樣在胸腺細(xì)胞，有許多IL-17A +RORγt的+雙陽(yáng)性細(xì)胞，而基本上沒(méi)有共表達(dá)Foxp3的或IFN-γ與IL-17A。脾細(xì)胞表達(dá)IL-17A很少。

　　底部面板中的（B），進(jìn)一步的分析表明，從脾臟表達(dá)的IL-17產(chǎn)生細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD44和CD196（CCR6），但不是CD62L，IL-17 +細(xì)胞的表型，提供額外的信息。

　　胸腺細(xì)胞或脾細(xì)胞表面熒光抗體染色，具體CD62L，CD44，CD196，或適當(dāng)?shù)拿庖咔虻鞍淄蛯?duì)照。細(xì)胞被固定和透BD Pharmingen公司轉(zhuǎn)錄因子緩沖器組，然后在細(xì)胞內(nèi)染色RORγt的，F(xiàn)oxp3的，IL-17和IFN-γ。中藥標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品網(wǎng)整理提供：www.atcc360.com

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