阪崎腸桿菌MMS基因檢測質粒DNA標準物質

??【編號】：GBW(E)100305

??【產(chǎn)品名稱】：阪崎腸桿菌MMS基因檢測質粒DNA標準物質

??【規(guī)格】：1.5mL；52.3 ng/μL(1.71×1010copies/μL)

??【用途】：

　　阪崎腸桿菌MMS基因檢測質粒DNA標準物質

　　編號: GBW(E)100305

　　規(guī)格: 1.5mL離心管

　　標準值：52.3 ng/μL(1.71×1010copies/μL)

　　不確定度:Urel=3.4%(k=2)

　　一、樣品制備

　　在GenBank中搜索阪崎腸桿菌的大分子合成操縱子（MMS）基因序列；對上述序列進行分析，選擇合適的序列和合適的酶切位點，并將酶切位點加至序列兩端；將處理后的序列進行全基因人工合成，并將所得全長基因分別克隆至質粒載體pUC19中，構建獲得包含目的基因序列的質粒DNA標準物質。利用大腸桿菌DH5α載體，復制生產(chǎn)，對目標質粒DNA進行提取純化，經(jīng)稀釋分裝得到質粒DNA樣品。

　　二、溯源性及定值方法

　　本標準物質中質粒DNA采用紫外分光光度法和高分辨電感耦合等離子體質譜法（HR-ICP-MS）進行定值。

　　核酸分子含有嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵，其紫外可見吸收光譜在260 nm附近有一強的吸收峰，針對雙鏈DNA，樣品濃度和吸光值之間有以下關系：雙鏈DNA樣品濃度= OD260×核酸稀釋倍數(shù)×50，其中OD260為核酸在260 nm處的吸光值。用超純水做空白對照，通過測定其在260 nm處的吸光值可換算出質粒濃度。

　　核酸分子中，每個堿基對應一個磷原子，根據(jù)公式：含磷量P%=堿基數(shù)*磷的原子量÷DNA分子量，即可計算出四個質粒DNA標準物質的含磷量。再利用HR-ICP-MS方法檢測標準物質樣品中的磷元素含量，計算得到質粒DNA標準物質的含量。

　　定值過程使用滿足計量學特性要求的測量方法和計量器具，保證其溯源性。

　　三、特性量值及不確定度

標準物質名稱	標準值	相對擴展不確定度
標準物質名稱	標準值	（k=2）
阪崎腸桿菌MMS基因檢測質粒DNA標準物質	[濃度]	3.40%

　　保質期: 12個月

　　來源：計量院

　　類別：國標物、阪崎腸桿菌MMS基因

　　聲明：此對照品、標準品由【中檢計量】提供網(wǎng)站查詢購買服務

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